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當前位置:首頁產品中心分子生物學試劑內切酶F7502S快速內切酶 ApaI

快速內切酶 ApaI
產品簡介

快速內切酶 ApaI。LabFD™ 快速內切酶是一系列經過基因工程重組的快速限制性內切酶,適用于質粒 DNA、PCR 產物或基因組 DNA 等的快速酶切。 所有 LabFD™ 快速內切酶在通用的LabFD™或LabFD™ Color Buffer中都具有優良的活性,能夠在 5~15 分鐘內完成酶切。

產品型號:F7502S
更新時間:2025-03-27
廠商性質:代理商
訪問量:167
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品牌LABLEAD貨號F7502S
供貨周期一周應用領域生物產業

貨號:F7502S

儲存條件:-20℃

 

同裂酶:Bsp120I, PspOMI 

注:同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

 

產品組成

組分

規格

LabFD™ ApaI

200ul

10×LabFD™ Buffer

2*1ml

10×LabFD™ Color Buffer

2*1ml

 

產品簡介

LabFD™ 快速內切酶是一系列經過基因工程重組的快速限制性內切酶,適用于質粒  DNA、PCR 產物或基因組  DNA 等的快速酶切。 所有  LabFD™ 快速內切酶在通用的LabFD™或LabFD™ Color Buffer中都具有優良的活性,能夠在  5~15 分鐘內完成酶切。此外,蘭博  利德去磷酸化、連接試劑在LabFD™  Buffer 中均具有  100% 活性,支持一管化反應,提升“酶切-修飾-連接"的體驗。

LabFD™ Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料,可將產物直接用于凝膠電泳。LabFD™ Color Buffer  的紅色染料與 2500 bp  雙鏈DNA 片段在1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近;黃色染料與10 bp雙鏈  DNA  片段在  1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

 

建議反應條件

1×LabFD™緩沖液;37℃溫育;參照“DNA快速酶切流程"配制反應體系。

失活條件

80℃溫育20min。

質量控制

功能活性檢測

37℃,在20ul反應體系中,1ul LabFD™ ApaI能夠在15min內完quan消化1ug p615 DNA。

超長時間溫育檢測

37℃下,將1ul LabFD™ ApaI與1ug p615 DNA共同溫育3h,未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,更長時間酶切可能出現星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測

37℃下,使用10 倍酶量的LabFD™ ApaI 消化DNA 底物,回收酶切產物,在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast)  可以將超過 95% 的酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后,使用相同的內切酶可以重新切開 95% 以上的連接產物。

 

使用方法

1.DNA快速酶切流程

①在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系:


質粒DNA

基因組DNA

ddH2O

15ul

30ul

10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer

2ul

5ul

底物DNA

2ul(up to 1ug)

10ul(5ug)

LabFD™ ApaI

1ul

5ul

Total

20ul

50ul

②輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時離心以收集掛壁液滴;

③75℃溫育15 min(質粒),或30~60 min(基因組 DNA);

④80℃溫育20min即可使酶失活,停止反應(可選);

⑤如果使用 LabFD™ Color Buffer 進行酶切反應,得到的產物可以直接進行上樣電泳。

 

2.雙酶切或多酶切

①每種快速內切酶的用量為1ul,并根據需要適當擴大反應體系;

②所有快速內切酶的體積總和不得超過總反應體系的1/10;

③如果所用的幾種快速內切酶的最適反應溫度不同,應先以最適溫度低的酶開始酶切,再添加最適溫度較高的酶,在其最適反應溫度下進行酶切反應。

 

3.適用于質粒的擴大反應體系

DNA

1ug

2ug

3ug

4ug

5ug

LabFDTM ApaI

1ul

2ul

3ul

4ul

5ul

10×LabFD™ Buffer或10×LabFD™ Color Buffer

2ul

2ul

3ul

4ul

5ul

Total

20ul

20ul

30ul

40ul

50ul

注:如果總反應體系大于20ul,應適當增加溫育時間,盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

 

不同DNA中的酶切位點數量

λDNA

ΦX174

pBR322

pUC57

pUC18/19

SV40

M13mp18/19

Adeno2

1

0

0

1

0

1

0

12

甲基化修飾影響

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

無影響

剪切受阻

剪切受阻

無影響

無影響

在不同反應緩沖液中的活性


LabFD™ Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart®Buffer

Takara

QuickCut™Buffer

活性

100%

<12.5%

100%

<12.5%

注:活性數據來自LABLEAD限制酶標準反應體系下的檢測。



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